病害侵染對(duì)苜蓿葉綠素含量變化的影響
苜蓿是一種富含蛋白質(zhì)的多年生豆科植物，具有廣泛的生態(tài)適應(yīng)性，是世界上廣泛種植的優(yōu)良牧草，適口性好，被譽(yù)為“牧草之王”。栽培苜蓿一般包括紫花苜蓿、黃花苜蓿和雜種苜蓿。它具有抗旱、耐鹽堿、抗風(fēng)沙等特點(diǎn)，其最適生態(tài)區(qū)為半溫帶和半濕潤(rùn)氣候區(qū)，我國(guó)大部分地區(qū)，尤其是西部地區(qū)及北方地區(qū)為苜蓿生長(zhǎng)適應(yīng)區(qū)。隨著苜蓿種植面積的擴(kuò)大，苜蓿病害已經(jīng)成為引起草地退化、減產(chǎn)、品質(zhì)下降的主要原因。尤其是苜蓿白粉病日趨嚴(yán)重，極大地影響了苜蓿產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。筆者通過(guò)對(duì)苜蓿不同品種感染白粉病后葉綠素含量的測(cè)定分析，旨在闡明白粉病對(duì)苜蓿葉綠素含量的影響，提出對(duì)實(shí)際生產(chǎn)具有指導(dǎo)意義的措施。
供試品種為塞特、德寶、德福、三德利(均引自荷蘭)，牧歌401、巨人201(均引自美國(guó))。供試菌種為白粉菌，采自蘭煉農(nóng)場(chǎng)試驗(yàn)地，在室內(nèi)6個(gè)苜蓿品種上繁殖保存。
選用無(wú)病種子，種植在裝有滅菌土的營(yíng)養(yǎng)缽中，在溫室培養(yǎng)(室溫17℃左右)。于分蘗前接種白粉菌，以不接菌為對(duì)照，將處理與對(duì)照隔離培養(yǎng)。接菌后第20天和第25天分別測(cè)定葉片中葉綠素含量，每處理重復(fù)3次。
用751G型分光光度計(jì)測(cè)定（也可以利用葉綠素檢測(cè)儀直接測(cè)定）：采集不同處理的苜蓿新鮮葉片，擦凈組織表面污物、剪碎(去掉中脈)，混勻；準(zhǔn)確稱取剪碎的新鮮樣品0.5 g，共3份，分別置于研缽中并加少量石英砂和碳酸鈣粉及2～3 ml 95%的乙醇研成勻漿，再加乙醇10 ml，繼續(xù)研磨至組織變白，靜置3～5min；將濾紙放入漏斗中，用乙醇潤(rùn)濕，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，濾入25 ml容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒、殘?jiān)?～3次，最后連殘?jiān)黄鸬谷肼┒�；用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中，直到濾紙和殘?jiān)袩o(wú)綠色，最后用乙醇定容至25 ml搖勻。把洗入的提取液倒入比色杯中，在665、649 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其消光度(O.D.)值，以95%乙醇為空白對(duì)照。按下式計(jì)算色素濃度及含量。
葉綠素含量(mg/g)=(色素的濃度×提取液的體積×稀釋倍數(shù))/樣品鮮重(g)式中Ca、Cb分別為葉綠素a和葉綠素b的濃度；D665、D649分別為葉綠體色素提取液在波長(zhǎng)665、649 nm下的消光度。
對(duì)6個(gè)具有不同抗性的苜蓿品種的葉片進(jìn)行的葉綠素含量測(cè)定結(jié)果(表1)表明，接種前感病品種與中感品種及抗病品種的葉綠素含量差異不顯著，接種白粉病后品種間葉綠素含量差異顯著，葉綠素含量隨接種時(shí)間的延長(zhǎng)和發(fā)病程度的增加而顯著降低。接種后第20天，中感品種和感病品種的葉綠素含量下降0.21～0.44 mg/g，抗病品種的葉綠素含量只下降0.07 mg/g；接種后第25天，中感品種和感病品種的葉綠素含量下降0.58～1.19 mg/g，抗病品種的葉綠素含量下降0.41 mg/g，而且外觀葉色差異也很明顯。說(shuō)明葉片中葉綠素含量與植株抗病性密切相關(guān)。但是葉綠素含量與抗病性間的定量關(guān)系及葉綠素含量能否作為品種對(duì)白粉病的抗性鑒定指標(biāo)之一，還有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。
表1 不同苜蓿品種的葉綠素含量的測(cè)定結(jié)果
