使用降落數(shù)值儀測(cè)定不同品種蘿卜淀粉酶活性
蘿卜屬十字花科蘿卜屬1、2a生草本植物，又名萊旅、蘆旅，是重要的世界性蔬菜。由于其生長(zhǎng)適應(yīng)性強(qiáng)，產(chǎn)量高，肉質(zhì)根營(yíng)養(yǎng)成分含量豐富，在中國(guó)、日本、韓國(guó)以及東南亞一些國(guó)家廣泛種植。蘿卜富含淀粉酶（不是淀粉）是一種超低熱量的蔬菜。由于其含富含粉酶，因此對(duì)胃部粘膜的修復(fù)具有很好的促進(jìn)作用，能夠防止胃酸過(guò)多、胃炎及胃潰瘍，同時(shí)能夠增強(qiáng)消化機(jī)能。因此，蘿卜一直以來(lái)都被認(rèn)為是有助消化的食品。
但是有關(guān)蘿卜淀粉酶的研究甚少，因此，該試驗(yàn)以不同蘿卜類(lèi)型品系及組合為試材，使用降落數(shù)值儀對(duì)不同蘿卜品種淀粉酶活性進(jìn)行比較研究，為進(jìn)一步開(kāi)展蘿卜淀粉酶純化和理化性質(zhì)研究及高淀粉酶活性品種選育提供基礎(chǔ)。
1 材料與方法
1.1試驗(yàn)材料
供試25個(gè)蘿卜品種及組合為S01、S02、S03、S04、S05及A1~A20.試劑為麥芽糖、3,5-二硝基水楊酸、NaOH、酒石酸鉀鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉和淀粉等。
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)田間試驗(yàn)于2010年7月中旬播種，采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，3次重復(fù)，共75個(gè)小區(qū)，小區(qū)面積約4m2,株行距為40cm×50cm,常規(guī)管理。于采收期每個(gè)小區(qū)隨機(jī)選取3個(gè)蘿卜，不同部位取樣混合后作為1個(gè)樣品，重復(fù)2次。
1.2.2試劑配制標(biāo)準(zhǔn)麥芽糖溶液（1mg/mL）：精確稱(chēng)取100mg麥芽糖，用蒸餾水溶解并定容至100mL;3,5-二硝基水楊酸試劑：精確稱(chēng)取1g3,5-二硝基水楊酸，溶于20mL2mol/LNaOH溶液中，加入50mL蒸餾水，再加入30g酒石酸鉀鈉，待溶解后用蒸餾水定容至100mL.蓋緊瓶塞，勿使CO2進(jìn)入；0.1mol/LpH5.6的檸檬酸緩沖液：
A液（0.1mol/L檸檬酸）：稱(chēng)取C6H8O7·H2O21.01g,用蒸餾水溶解至1L.
B液（0.1mol/L檸檬酸鈉）：稱(chēng)取Na3C6H5O7·2H2O29.41g用蒸餾水定容至1L.取A液55mL與B液145mL混勻，即為0.1mol/LpH5.6的檸檬酸緩沖液；1%淀粉溶液：稱(chēng)取1g淀粉溶于100mL0.1mol/LpH5.6的檸檬酸緩沖液中。
1.2.3樣品制備稱(chēng)取1g左右蘿卜肉質(zhì)根置于研缽中，加少量石英砂和2mL蒸餾水，研磨勻漿。將勻漿倒入離心管中，用6mL蒸餾水分次將殘?jiān)慈腚x心管。
提取液在室溫下放置提取15~20min,每隔數(shù)分鐘攪動(dòng)1次，使其充分提取。然后在3000r/min轉(zhuǎn)速下離心10min,將上清液到入100mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，即為淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液10mL,放入50mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，即為淀粉酶稀釋液。
1.2.4麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作精確稱(chēng)取100mg麥芽糖，用蒸餾水溶解并定容至100mL即為標(biāo)準(zhǔn)麥芽糖溶液（1mg/mL）：用移液器分別吸取0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8和2.0mL的麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)液分別放置干凈的具塞刻度試管中，加蒸餾水至2.0mL,混勻后分別加入2mL3,5-二硝基水楊酸試劑，搖勻，置沸水浴中煮沸5min.取出后流水冷卻，加蒸餾水定容至20mL.以1號(hào)管作為空白調(diào)零點(diǎn)，在540nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定。
1.3項(xiàng)目測(cè)定
利用降落數(shù)值儀測(cè)定蘿卜肉質(zhì)根的淀粉酶總活性、α？淀粉酶活性及β？淀粉酶活性�；盍τ�(jì)量單位：麥芽糖（mg）/（g·5min）樣品鮮重。
2 結(jié)果與分析
2.1麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)根據(jù)測(cè)定結(jié)果，采用Excel進(jìn)行擬合，得擬合方程： Y=0.3456x-0.0391.
2.2不同蘿卜品種α，β？淀粉酶活性及總酶活性的比較由表1可知，不同蘿卜品種和組合的α？淀粉酶活性、β？淀粉酶活性和總淀粉酶活性均達(dá)到了顯著或極顯著的水平。25個(gè)品系及組合中總淀粉酶活性的變異范圍為麥芽糖43.65~86.70mg/（g·5min），β？淀粉酶活性的變異范圍為麥芽糖32.58~79.67mg/（g·5min）。品種S03的總淀粉酶活性和β？淀粉酶活性均最高分別為麥芽糖86.70和79.67mg/（g·5min），其后品種依次為A12、A17、A06和A19,而品種A04總淀粉酶活性和β？淀粉酶活性均最低。
3 討論與結(jié)論
測(cè)定淀粉酶活性的方法較多，如降落數(shù)值法、凝膠擴(kuò)散法等，其中降落數(shù)值法靈敏、準(zhǔn)確、精確度高，在國(guó)內(nèi)有許多學(xué)者都運(yùn)用降落數(shù)值法來(lái)研究淀粉酶活性，但是操作過(guò)程復(fù)雜且嚴(yán)格，為了降低誤差，該研究在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中將樣品，按照區(qū)組每次重復(fù)為1組同時(shí)測(cè)定，共分3組同時(shí)利用電腦定時(shí)精確到每個(gè)樣品的反應(yīng)時(shí)間，而且測(cè)定時(shí)均設(shè)重復(fù)，從多個(gè)角度較少誤差，并利用統(tǒng)計(jì)分析排除外界誤差，提高測(cè)定的準(zhǔn)確度。該研究結(jié)果證明了不同蘿卜品種總淀粉酶活性、α？淀粉酶活性和β？淀粉酶活性的淀粉酶活性差異均顯著，也說(shuō)明在遺傳上也存在著質(zhì)的區(qū)別。
