組培培養(yǎng)室對試管葡萄根苗繁殖的可行性
利用組培培養(yǎng)室對葡萄根苗進行試管的繁殖方法，是我國作物研究的一個重大突破。此技術(shù)是利用試管苗在組培培養(yǎng)室條件下即可進行大規(guī)模的繁殖和開發(fā)，從而解決了室內(nèi)繁殖條件要求高、外移易污染的問題，為今后生物技術(shù)領(lǐng)域大規(guī)模組培繁殖、生產(chǎn)開發(fā)提供了一條實現(xiàn)高移栽成活率、低成本、實用化強的技術(shù)途徑。
1 技術(shù)特點
1.1 組培培養(yǎng)室葡萄試管的繁殖方法，取代了傳統(tǒng)的組培培養(yǎng)室繼代生產(chǎn)繁殖模式，實現(xiàn)了常規(guī)條件下的繁殖生產(chǎn)，解決了組培繁殖易污染的問題。
1.2 在組培培養(yǎng)室內(nèi)繁殖時以蛭石為培養(yǎng)基質(zhì)，減少了實驗室精密儀器、設(shè)備以及各種化學藥品的大量投入，從而大大降低了生產(chǎn)成本。
1.3 技術(shù)操作簡單易行，繁殖增殖效率高。
1.4 生產(chǎn)繁殖的幼苗健壯，株型緊湊，葉片濃綠，抗病性強，外移成活率高。
1.5 組培培養(yǎng)室葡萄試管的繁殖方法，可移植應(yīng)用于其他多種名貴木本、花卉組培試管苗的大規(guī)模繁殖與開發(fā)。
2 操作要點
2.1 組培培養(yǎng)室的建造及相關(guān)設(shè)備安裝根據(jù)繁殖任務(wù)的需要，建造（或改造） 1座組培培養(yǎng)室，坐北朝南，并覆膜和安裝自動防寒被（或草苫）。
防寒被（或草苫）上架設(shè)可收放的透光率50%左右的遮陽網(wǎng)，網(wǎng)、膜之間的距離最小不得少于50 cm.棚內(nèi)按畦寬110~115m南北向做畦鋪設(shè)地熱線，地熱線埋深4~5 cm.畦面踩實耙平。
購置蛭石（粒徑1~3mm）、育苗盤、營養(yǎng)缽、竹片、薄膜等物資。
2.2 組培培養(yǎng)室的補濕與消毒以上設(shè)備安裝完畢后，溫室內(nèi)噴水補濕，使空氣濕度達到70%以上。為防止植物材料污染，使用前可用重量比為5︰3的甲醛+高錳酸鉀進行進行溫室內(nèi)熏煙消毒。每100m2棚內(nèi)面積用量約為2 kg甲醛+112 kg高錳酸鉀。消毒時，先將高錳酸鉀放入一較大的容器內(nèi)（防止藥物反應(yīng)后藥液溢出），再將甲醛倒入容器，然后，人員迅速撤出溫室。
2.3 試管苗的瓶內(nèi)馴化將達到要求高度的葡萄試管苗（一般每株小苗達5~7節(jié)，繁殖系數(shù)可達到6左右）移入組培培養(yǎng)室，擺放于畦內(nèi)進行馴化。溫室溫度控制在15~30e,濕度控制在50% ~70%.在規(guī)定溫度范圍內(nèi)，逐漸增強溫室內(nèi)的光照強度，使瓶內(nèi)試管苗逐漸適應(yīng)組培培養(yǎng)室內(nèi)的溫度和濕度環(huán)境條件。當光照強、溫度高時，進行遮光管理，以防止燒苗。一般馴化3~5 d即可，期間逐漸打開封口膜。當打開封口膜后，試管苗無萎蔫現(xiàn)象時，即可進行扦插繁殖。
2.4 育苗盤（扦插盤）的處理將育苗盤裝滿蛭石后用木板刮平，然后浸于配制好的營養(yǎng)液中（營養(yǎng)液為1/2~1/4不含糖的改良B5葡萄培養(yǎng)液），浸透后取出，控去多余水分，按2 cm@2 cm左右株行距劃格定位。備用。
2.5 莖段的扦插將已馴化好的試管苗用鑷子從培養(yǎng)瓶中取出，按統(tǒng)組培方法把試管苗單節(jié)剪斷。將單節(jié)莖段速蘸生根液后，按劃定好的位置扦插在育苗盤內(nèi)，扦插深度以達到葉柄處為宜。待每個育苗盤扦插完畢，噴灑滅菌藥液，以防止污染致病。同時彌合插孔，使扦插材料與蛭石緊密接觸。
2.6 扦插后的管理首先接通地熱線，提高地溫。再將噴灑滅菌藥液后的扦插苗盤，擺放在鋪有地熱線的畦內(nèi)。擺滿后支小拱棚，并覆蓋薄膜。如果扦插季節(jié)較早，棚內(nèi)溫度較低，可在小拱棚外再覆以無紡布，以保持小拱棚內(nèi)的溫度。
小拱棚內(nèi)置溫度計，將晝夜溫度控制在25~28e.扦插莖段生根后（扦插后3~5 d），視葉片的適應(yīng)情況逐漸撤除薄膜煉苗，使之適應(yīng)棚內(nèi)的溫度和濕度條件。此時，莖段基本已生根且根系較短，可移栽至營養(yǎng)缽內(nèi)。
2.7 小苗移栽及管理按園土、廄肥體積比為（4~5）B1的比例配制好營養(yǎng)土，使用上口直徑6 cm、高12 cm的營養(yǎng)缽移栽小苗。將生根小苗移栽至營養(yǎng)缽后，緊密擺放在畦內(nèi)，澆透水并噴灑滅菌藥劑，以防止小苗染病。
在移栽小苗的畦上支小拱棚，保溫保濕。小拱棚內(nèi)溫度控制在22~28e;濕度從100%逐漸降低，至與溫室濕度相同。隨著日齡的增加，小苗達2葉1心時，逐步打開小拱棚進行煉苗。全部小拱棚撤除薄膜后，視情況澆水，并隨施1次015%的復合肥水。
2.8 煉苗外移苗高達到3~4葉時，大田移栽前，要逐漸打開溫室棚膜煉苗，并控制澆水，使之適應(yīng)棚外的自然條件，以保證外移成活率。
如果連續(xù)進行繁殖，可用營養(yǎng)缽苗為繁殖材料，重復初代扦插程序即可。
3 繁殖結(jié)果
3.1 生長特征組培培養(yǎng)室微型扦插繁殖的30日齡赤霞珠幼苗較同日齡培養(yǎng)室繁殖苗（對照）相比，小苗株型緊湊，根系發(fā)達，莖蔓粗度為對照的115倍以上，高度低于對照，但挺拔健壯，葉色濃綠，外移成活率高（表1）。在低溫、高濕條件下很容易感染立枯病而大量死苗，最高死苗率高達80%以上。
3.2 抗病性 在傳統(tǒng)的組培繁殖過程中，當試管苗外移馴化時但利用組培培養(yǎng)室進行微型扦插培養(yǎng)的赤霞珠小苗，基本解決了爛苗、死苗問題，提高了外移成活率（表2），從而極大地降低了生產(chǎn)成本。
3.3 繁殖效率在培養(yǎng)室繁殖增殖條件下，1名熟練的室內(nèi)繼代轉(zhuǎn)接技術(shù)人員每天可轉(zhuǎn)接試管苗200瓶約1000株。而在組培培養(yǎng)室微型扦插繁殖條件下，1名熟練的普通工人每天可扦插3000株左右�？梢姡⑿颓げ�繁殖效率可提高2~3倍以上，從而大大降低了人工費用。
