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　  仿刺參是中國北方海水養(yǎng)殖的新興種類，其營養(yǎng)和藥用價值較高，因而養(yǎng)殖面積不斷擴(kuò)大。飼料是海參養(yǎng)殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。隨著海參養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，對海參飼料的研究越來越受到人們的關(guān)注。目前有關(guān)仿刺參幼體和稚參餌料的研究較多，但對幼參和成參的營養(yǎng)需求研究甚少。朱偉等認(rèn)為，仿刺參稚參飼料中蛋白質(zhì)和脂肪的最適含量分別為18.21%~24.18%和5.0%。在他們的試驗(yàn)中以魚粉和酪蛋白為蛋白源，以稚參為研究對象，而對幼參在常用蛋白源條件下的適宜脂肪需要量尚未進(jìn)行深入研究。生產(chǎn)上常因飼料中脂肪添加量和方法不當(dāng)引起海參化皮，也制約了對飼料脂肪含量的深入研究。

     為此，作者于2006年4月至6月研究了飼料蛋白質(zhì)含量為19.8%時，不同脂肪含量(試驗(yàn)1)和乳化劑含量(試驗(yàn)2)對仿刺參幼參生長和體成分的影響，旨在弄清幼參人工配合飼料中脂肪的適宜含量，為配制幼參的適宜飼料提供參考資料，飼料中的脂肪含量利用脂肪抽提儀SZF-06進(jìn)行控制，務(wù)必保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

1.1　材料

     試驗(yàn)1中用的仿刺參取自大連水產(chǎn)學(xué)院養(yǎng)殖場，體質(zhì)量平均為2.71 g，暫養(yǎng)2周后，挑選480頭規(guī)格整齊、體色鮮亮、體質(zhì)健壯的仿刺參用弗苯尼考液消毒后，隨機(jī)分成6組，每組設(shè)4個重復(fù)，分別投喂6種不同脂肪含量的飼料。試驗(yàn)在50L(45 cm×31 cm×30 cm)的塑料水槽中進(jìn)行，每個水槽中放養(yǎng)20頭仿刺參。

     試驗(yàn)2中用的仿刺參來源同上，體質(zhì)量平均為5.48 g。暫養(yǎng)2周后，挑選健康仿刺參進(jìn)行試驗(yàn)，水槽規(guī)格同上。試驗(yàn)分為4組，每組設(shè)4個重復(fù)，分別投喂4種不同乳化劑含量的飼料。每個水槽中放養(yǎng)10頭仿刺參。

1.2　試驗(yàn)飼料

     試驗(yàn)1中投喂的飼料以魚粉、蝦糠和玉米蛋白為蛋白源(表1)，蛋白質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為19.8%；以深海魚油為脂肪源，脂肪的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為2.80%、3.65%、4.50%、5.35%、6.20%和7.05% (分別記為S1 ~S6組)，添加脂肪含量10%的大豆卵磷脂作為乳化劑和黃原膠增稠劑。

     深海魚油乳化后先用玉米蛋白和貝殼粉作為第一稀釋劑，混合研磨均勻，然后逐步加入其它成分研磨、混合，再加入到飼料中。飼料中其它原料均經(jīng)200目篩絹過濾，除去上層，混合均勻，做成粉狀混合物。使用前分別添加不同含量的深海魚油制成梯度飼料，低溫下貯存?zhèn)溆谩Ｍ段骨坝?0℃左右的熱水?dāng)嚢杈鶆�，放置至室溫，待酵母發(fā)揮作用后成為松軟合適的膏狀飼料再投喂。投喂時將飼料均勻涂抹到波紋板上，放在水槽底部，并將充氣石壓在板下，涂抹飼料面要朝上，以防止飼料被沖散。

     飼料增稠后不易在槽中分散，仿刺參攝食飼料后排出的糞便也呈規(guī)則的長條狀，不分散，有利于殘餌和糞便的辨別和收集。

     試驗(yàn)2中的飼料蛋白和脂肪含量分別為24%和5.0%，以大豆油作為脂肪源，在脂肪中分別加入0、5%、10%和15%的大豆卵磷脂作為脂肪乳劑(分別記為f1~f4組)。飼料配方為(質(zhì)量分?jǐn)?shù))：魚粉8.0%，蝦糠6.0%，海泥28.3%，大豆油和卵磷脂2.1%，馬尾藻粉28%，貝殼粉5%，玉米蛋白20%，復(fù)合維生素、礦物素1.2%，酵母、黏合劑1.2%，抗氧化劑0.2%。其他成分均同試驗(yàn)1。

1.3　飼養(yǎng)管理

     試驗(yàn)1，采用經(jīng)沉淀、曝氣1d的自然海水，水溫為11.5~21.5℃。傍晚根據(jù)仿刺參的攝食情況過量投喂，隔天收集殘餌和糞便。水溫高于16℃后，傍晚投喂，第二天收集殘餌和糞便，換水。全天充氧，水中溶氧量(DO) >7.0 mg/L；TNH3-N<0.1 mg/L。每20d稱量各箱中仿刺參總重，試驗(yàn)開始和結(jié)束時，逐頭稱量仿刺參的體重，中間稱量總重，稱重前一天停止投喂。特殊增長率(SGR)的計(jì)算公式為

試驗(yàn)2，在控溫條件下進(jìn)行，水溫為11.5~14.5℃，每5d換水一次，每次換水量為2/3。抽取自然海水，在室內(nèi)控溫3d后加入水槽，全天充氧。試驗(yàn)開始與結(jié)束時停食1d稱量總重。

1.4　樣品收集和指標(biāo)測定

     在試驗(yàn)1和試驗(yàn)2的開始和結(jié)束時，從兩個試驗(yàn)的各組中分別隨機(jī)取15頭和7頭仿刺參(置于-70℃下保存，同時處理和測定)，在75℃下烘至恒重，分別用凱氏定氮法、索氏抽提法(以乙醚為抽提液)和馬福爐灼燒法(600℃， 6 h)測定粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量；用氣相色譜儀分析脂肪酸種類和含量；用解剖稱量法測定臟壁比；用Cr2O3指示劑法測定脂肪消化率，其計(jì)算公式為

     其中：E和E′分別為飼料和糞便中營養(yǎng)物質(zhì)的含量； B和B′為飼料和糞便中Cr2O3的含量。

1.5　酶活性的測定

     試驗(yàn)2結(jié)束時，測定各種酶的活力。方法是：從每個試驗(yàn)組取仿刺參12頭，置于冰盤內(nèi)，解剖取出全部腸，用去離子水清洗腸內(nèi)含物后研磨離心，取上清液，每個平行組中每3頭參的腸混合樣品為一重復(fù)，每個平行組設(shè)4個重復(fù)。腸道樣品置于-70℃下保存?zhèn)溆�。按參考文獻(xiàn)的方法測定腸道中淀粉酶、蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶的活性和超氧化物歧化酶(SOD)對底物鄰苯三酚的抑制率。

1.6　數(shù)據(jù)處理

     所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行相關(guān)性檢驗(yàn)、方差分析和LSD多重比較。以P< 0.01為差異極顯著，P< 0.05為差異顯著。

2.1　試驗(yàn)1

2.1.1　飼料中脂肪含量對仿刺參生長的影響　

     在60d的飼養(yǎng)過程中，除S3組在試驗(yàn)初有1頭仿刺參化皮死亡外，其余各組仿刺參無死亡和排臟現(xiàn)象，表明飼料中脂肪的含量對幼參的成活率和排臟率無顯著影響(P>0.05)。但飼料中脂肪含量對仿刺參的生長有顯著影響(P<0.05，表2)。整個試驗(yàn)期間，幼參的SGR隨飼料中粗脂肪含量的增加(S6組除外)而逐漸增加，且飼料中粗脂肪含量為6.20%時，幼參的SGR達(dá)最大值，但當(dāng)飼料中粗脂肪的含量增至7.05%時，幼參的SGR反而下降。試驗(yàn)結(jié)束時， S3組幼參的SGR與S6組間差異不顯著， S4組與S5組差異顯著(P<0.05)，表明幼參的適宜脂肪需要量為5.35% ~7.05%。二次回歸曲線表明，最大生長對應(yīng)的脂肪含量為5.88% (圖1)。

     不同試驗(yàn)階段水溫不同，仿刺參的生長速度即SGR也不同。前20d內(nèi)，水溫為11.5~14.0℃，仿刺參個體較小，剛開始活躍攝食，各組間的SGR值差異小，雖然S2組和S3組生長較快，但各組間差異均不顯著(P>0.05)；第20~40 d內(nèi)，水溫為14.0~16.5℃，SGR增長明顯，從第一個20d的平均1.0%升至第二個20 d的1.5%以上，其中S4組、S5組和S6組達(dá)到2.0%以上，且S5組與S1組、S2組和S3組差異顯著(P<0.05)；試驗(yàn)前40d內(nèi)，S5組與S1組、S2組、S3組和S6組差異顯著(P<0.05)；在最后20 d內(nèi)，水溫為16.5~21.5℃，各組仿刺參生長緩慢，個別仿刺參甚至呈零增長或負(fù)增長，組內(nèi)各重復(fù)箱中仿刺參的生長速度波動幅度較大，各組間差異不顯著(P>0.05)。

2.1.2　仿刺參幼參對飼料中脂肪的消化率　

     試驗(yàn)期間，第20 ~40d，水溫為14.0~16.5℃，仿刺參生長最快，對脂肪的消化率具有代表性。此間，幼參對飼料中脂肪的消化率隨飼料中脂肪含量的升高而降低(表3)。脂肪消化率只能表示仿刺參對飼料中脂肪的相對利用率，并不能直觀反映仿刺參對飼料中脂肪的實(shí)際利用率，因此本研究中用表觀脂肪消化率與飼料中脂肪含量的乘積表示仿刺參吸收的脂肪量，謂之表觀消化脂肪占飼料含量。此值在飼料中脂肪含量≤6.20%時隨飼料中脂肪含量的升高而升高，但當(dāng)飼料中脂肪含量達(dá)7.05%時，反而降低。

      用Cr2O3法測定表觀脂肪消化率時需樣品極少，計(jì)算步驟復(fù)雜，誤差較大，且仿刺參具有隨時攝食和排便的習(xí)性，對糞便的及時收集造成一定的困難；排出的糞便在槽中停留一天難免有一定的損失，也會影響測定結(jié)果。為了減少隨機(jī)取樣造成的誤差，在收集糞便時將4個平行連續(xù)兩次投喂的糞便收集在一起，烘干研磨后，取3次測定的平均值進(jìn)行比較(表3)。仿刺參對飼料蛋白、脂肪等營養(yǎng)物質(zhì)的消化率低，主要緣于仿刺參生理習(xí)性——食物在腸道內(nèi)停留時間短。

2.1.3　飼料中脂肪含量對仿刺參體(含內(nèi)臟)成分的影響　

     養(yǎng)殖結(jié)束時(水溫為21.5℃)，測定了仿刺參內(nèi)臟和體腔液之和與體壁之比。結(jié)果為0.40≤R≤0.55，因體腔液造成數(shù)值誤差較大，稱量時盡量增大樣本數(shù)而未作統(tǒng)計(jì)分析。

     仿刺參體內(nèi)脂肪含量與飼料中脂肪含量密切相關(guān)。隨著飼料中脂肪含量的增加，仿刺參體內(nèi)脂肪含量略有升高，但前5組之間差異不顯著(表4)(P>0.05)，僅S6組與其他組間差異顯著(P<0.05)，表明飼料中脂肪的含量低于6.20%時，對仿刺參體內(nèi)脂肪含量無顯著影響；當(dāng)飼料中脂肪含量高于7.05%時，仿刺參體內(nèi)脂肪含量才顯著升高。各組仿刺參體水分含量和蛋白質(zhì)含量差異均不顯著(P>0.05)。

      試驗(yàn)始末仿刺參體內(nèi)18：3n-3(LNA)的含量都低于0.5%。從圖2可見：試驗(yàn)?zāi)┓麓虆Ⅲw內(nèi)18： 2n-6 (LA)含量有部分增加，20： 4n -6(AA)、20： 5n-3 (EPA)和22：6n-3(DHA)等脂肪酸含量均比初始(S0組)時大幅減少；試驗(yàn)初仿刺參體內(nèi)AA含量大于DHA和LA含量，試驗(yàn)?zāi)〥HA平均含量高于AA含量，LA平均含量接近AA含量，表明飼料中脂肪含量會影響仿刺參體內(nèi)脂肪酸的組成。

     試驗(yàn)初仿刺參體內(nèi)EPA含量比其他3種脂肪酸含量高，試驗(yàn)?zāi)┍３至诉@一規(guī)律。試驗(yàn)?zāi)┓麓虆Ⅲw內(nèi)EPA含量明顯高于飼料中的含量(4.58% ~7.68% )，而且其含量變化也并非完全隨飼料中含量的增加而升高，說明仿刺參體內(nèi)EPA還受到其他成分的影響，可以由其他的成分轉(zhuǎn)化而成　仿刺參攝食含不同脂肪量的飼料時，體內(nèi)4種脂肪酸的含量變化規(guī)律似乎雜亂，而4種脂肪酸之和由高至低依次為：S5組(32.96% ) > S4組(32.02% )>S3組(31.83% )>S2組(30.84% )>S6組(29.68% )>S1組(28.27% )(圖2)，含量規(guī)律基本與生長規(guī)律相同，即仿刺參的生長是伴隨著體內(nèi)多不飽和脂肪酸含量的增高而加快的。

2.2　試驗(yàn)2

2.2.1　飼料中乳化劑含量對仿刺參生長和酶活力的影響　

     飼料中添加不同含量大豆卵磷脂后，仿刺參腸道研磨液中脂肪酶活力低，無法用普通的橄欖油乳化劑法檢測出，蛋白酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶活力之間差異不顯著。

f3組的SGR顯著高于f4組(P<0.05) (表5)。

2.2.2　飼料中乳化劑含量對仿刺參生化組成和消化率的影響　

     從表6可見：飼料中添加乳化劑后，仿刺參體內(nèi)水分、灰分和脂肪含量差異不顯著； f1組的仿刺參體內(nèi)蛋白質(zhì)含量顯著高于f2和f3組，與f4組差異極顯著(P<0.01)。與魚類等水生動物相比，仿刺參體灰分含量較高(占身體干重35%以上)，蛋白質(zhì)含量較低(魚粉蛋白質(zhì)含量為60%~70%)，蛋白質(zhì)、脂肪和灰分之和占身體干重83%以上。

     攝食添加不同劑量乳化劑飼料的仿刺參對飼料蛋白的表觀消化率差異不顯著，但f1組的仿刺參對飼料粗脂肪的消化率顯著低于f2、f3和f4組(P<0.05)，即飼料中添加乳化劑使刺參對脂肪的消化率提高。試驗(yàn)中沒有發(fā)現(xiàn)仿刺參排臟和化皮現(xiàn)象，但在試驗(yàn)?zāi)┙馄蕼y定臟壁比時，發(fā)現(xiàn)各組有不同程度的內(nèi)臟萎縮、消失和次生小腸。f1~f4組仿刺參中無腸和次生小腸率分別為10%、5%、5%和10%，還有個別中等大小的腸無法辨別是否曾經(jīng)萎縮，即說明添加乳化劑的f2和f3組效果優(yōu)于f4組和不添加的f1組(表6)。各組仿刺參的臟壁比差異均不顯著(P>0.05)。

      綜合SGR、脂肪消化率和乳化劑對抑制仿刺參腸萎縮的作用來看，飼料中乳化劑的適宜添加量為10%。

3.1　仿刺參飼料中脂肪的適宜含量

     不同水產(chǎn)動物對飼料脂類的需求量各異。商品對蝦飼料中脂類的推薦量多為6.0% ~10.0%；多數(shù)淡水魚類飼料中適宜的脂類含量為3% ~8%，海水和半咸水主要養(yǎng)殖魚類對脂類的適宜需要量多在10% ~13%。為了降低蛋白質(zhì)的添加量，用特殊的加工方法，可將虹鱒Oncorhy-chusmysis和哲羅魚Hucho taimen等冷水魚類飼料中的脂類增加到20%以上。本試驗(yàn)中，仿刺參幼參飼料中脂肪的最適含量為5.35% ~7.05%，最大生長對應(yīng)的脂肪含量為5.88% (圖1)。由此可見，仿刺參幼參飼料脂肪的適宜含量接近對蝦，高于朱偉等的研究結(jié)果(5.0%)，與殼徑6~16mm的稚綠球海膽對飼料脂肪的需要量(6.0%)相近。

     仿刺參對飼料中脂肪的需要量不僅與種類、規(guī)格和生理狀況等有關(guān)，還受環(huán)境條件的影響。本試驗(yàn)中采用天然海水，每天全部換新水，基本反映了仿刺參在自然條件下的生長情況。在試驗(yàn)前20d，水溫由11.5℃逐漸升至14.0℃，仿刺參生長較慢，攝食含不同數(shù)量脂類的飼料時， SGR差異不顯著，這可能是由于水溫較低，仿刺參需要適應(yīng)試驗(yàn)飼料和原來的體質(zhì)差異所致。在試驗(yàn)的第二個20 d，仿刺參已適應(yīng)了試驗(yàn)飼料，水溫從14.0℃逐漸升至16.5℃，S5組(飼料脂肪6.20%)仿刺參的生長最快，其SGR顯著高于S1、S2、S3組(P<0.05)。在第三個20d內(nèi)，水溫為16.5 ~21.5℃，各組仿刺參生長緩慢，各組間差異不顯著(P>0.05)。生長最快的S5組仿刺參3個階段的生長量分別占總生長量的25.59%、64.10%和10.31%。一些學(xué)者的研究結(jié)果表明：仿刺參在水溫2~20.0℃下均可生長，在11~17℃下較為適宜，最適水溫為15~16℃，在這個時期仿刺參飼料中脂類的最適含量在6.0%左右。本試驗(yàn)結(jié)果與上述結(jié)果相符。在遼寧和山東等地，仿刺參的適宜生長期分別為5—7月和9—10月，抓住這個有利飼養(yǎng)時期，投喂脂肪和蛋白質(zhì)含量適宜且營養(yǎng)平衡的飼料，能有效促進(jìn)仿刺參的生長。

3.2　仿刺參飼料中乳化劑的作用

     為了減少飼料中蛋白質(zhì)的用量，配制能量與蛋白平衡的飼料，降低飼料成本，目前多采用特殊的飼料加工成型方法，盡量增加飼料中脂肪的含量。仿刺參對油脂特別敏感，添加不當(dāng)或過量常引起仿刺參排臟或化皮，因此，限制了仿刺參對飼料中脂類的需要量。本試驗(yàn)中采用先將油脂在10%卵磷脂中乳化后再添加的方法，顯著提高了脂肪的消化率，較好地解決了這一問題。

     大豆油中主要成分為飽和脂肪酸，深海魚油中高度不飽和脂肪酸含量豐富。試驗(yàn)2飼料所用大豆油中添加了不同含量的乳化劑，均發(fā)現(xiàn)仿刺參有不同程度的腸萎縮現(xiàn)象；而試驗(yàn)1末期，即使是脂肪含量最高的S6組也沒有發(fā)現(xiàn)無腸和腸變小者，或者已經(jīng)長出新腸而無法辨別。但在試驗(yàn)2暫養(yǎng)階段，曾經(jīng)發(fā)生過因未乳化的大豆油研磨不均勻造成其中1槽有1/4仿刺參排臟的現(xiàn)象；且因?yàn)橛衩椎鞍鬃鳛橛椭�第一稀釋��，表面油脂覆蓋率高，在試驗(yàn)2仿刺參殘餌中主要含黃色的玉米蛋白，而試驗(yàn)1此種現(xiàn)象不明顯。據(jù)此筆者認(rèn)為，仿刺參飼料中脂肪的含量引起仿刺參排臟或腸道萎縮的現(xiàn)象除與仿刺參身體狀態(tài)、食欲、季節(jié)等因素密切相關(guān)外，還與脂肪的種類密切相關(guān)，豐富的高度不飽和脂肪酸(包含了動物生長所需的必需脂肪酸)能夠有效促進(jìn)仿刺參的生長，增強(qiáng)體質(zhì)。試驗(yàn)2中將水溫控制在仿刺參的適宜生長范圍之內(nèi)，仿刺參的SGR明顯低于試驗(yàn)1，這也充分證明上述觀點(diǎn)。

     4種高度不飽和脂肪酸通常包含了海水魚類的必需脂肪酸，魚類對DHA的需求量高于EPA。仿刺參體內(nèi)EPA的含量顯著高于其它幾種(圖2)，對EPA的需求量高于DHA成為仿刺參飼料的特點(diǎn)。試驗(yàn)結(jié)束時，仿刺參體內(nèi)4種高度不飽和脂肪酸的含量基本低于試驗(yàn)初體內(nèi)含量，說明試驗(yàn)飼料中脂肪酸成分對仿刺參的符合度仍難以達(dá)到試驗(yàn)前仿刺參天然餌料的成分。但4種高度不飽脂肪酸在體內(nèi)含量并非完全隨飼料含量同向變化，說明4種脂肪酸并非全部是仿刺參的必需脂肪酸。確定仿刺參飼料中必需脂肪酸成分及其含量成為下一步工作的研究重點(diǎn)。