谷類、豆類作物種子粗蛋白質(zhì)測定法（半微量凱氏法）
GB 2905—82
1 適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)適用于測定谷類、豆類作物種子粗蛋白質(zhì)含量。
2 儀器、設(shè)備
2.1 分析天平：感量0.0001克。
2.2 實驗室用粉碎機(jī)。
2.3 半微量凱氏蒸餾裝置（推薦使用龍科－A型半微量蒸餾裝置）。
2.4 半微量滴定管：容積10毫升。
2.5 硬質(zhì)凱氏燒瓶：容積25毫升，50毫升。
2.6 錐形瓶：容積150毫升。
2.7 電爐：600瓦。
3 試劑
3.1 鹽酸（GB 622—77）或硫酸（GB 625—77）。分析純。0.02 N、0.05 N標(biāo)準(zhǔn)溶液（鄰苯二甲酸氫鉀法標(biāo)定）。
3.2 氫氧化鈉（GB 629—77）：工業(yè)用或化學(xué)純。40％溶液（W/V）。
3.3 硼酸－指示劑混合液。
3.3.1 硼酸（GB 628—78）：分析純。2％溶液（W/V）。
3.3.2 混合指示劑：溴甲酚綠（HG 3—1220—79）0.5克，甲基紅（HG 3—958—76）0.11克，分別溶于95％乙醇中，混合后稀釋至100毫升。將混合指示劑與2％硼酸溶液按1∶100比例混合，用稀酸或堿調(diào)節(jié)pH值為4.5，使呈灰紫色。即為硼酸─指示劑混合液。
注：此溶液放置時間不宜過長，需在一個月之內(nèi)使用。
3.4 加速劑：五水合硫酸銅（GB 665—78）分析純，10克，硫酸鉀（HG 3—920—76）分析純，100克，在研缽中研磨，仔細(xì)混勻，過40目篩。
3.5 濃硫酸（GB 625—77）比重1.84，無氮。
3.6 30％過氧化氫（HG 3—1082—77）：分析純。
3.7 30％過氧化氫－硫酸混合液（簡稱混液）：30％過氧化氫、硫酸、水的比例為3∶2∶1，即在100毫升蒸餾水中慢慢加入200毫升濃硫酸，待冷卻后，將其加入300毫升30％過氧化氫，混勻。
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注： |
此混液可一次配制500～1000毫升貯藏于試劑瓶中備用。夏天最好放入冰箱或蔭涼處貯藏，室溫（20℃）上、下時不必冷藏，貯藏時間不超過一個月。 |
3.8 蔗糖（HG 3—1001—76）：分析純。
4 試樣的選取和制備
4.1 選取有代表性的種子（帶殼種子需脫殼）挑揀干凈，按四分法縮減取樣，取樣量不得少于20克。
4.2 將種子放于60～65℃烘箱中干燥8小時以上，用粉碎機(jī)磨碎，95％通過40目篩，裝入磨口瓶備用。
5 測定步驟
5.1 稱樣 稱取0.1克試樣兩份（含氮1～7毫克），準(zhǔn)確至0.0001克，同時測定試樣的水分含量。
5.2 消煮：
5.2.1 將試樣置于25毫升凱氏瓶中，加入加速劑粉末。除水稻為1克外，其他均為2克。然后加3毫升濃硫酸，輕輕搖動凱氏瓶，使試樣被硫酸濕潤，將凱氏瓶傾斜置于電爐上加熱，開始小火，待泡沫停止后加大火力，*保持凱氏瓶中的液體連續(xù)沸騰，沸酸在瓶頸中部冷凝回流。待溶液消煮到無微小的碳粒并呈透明的藍(lán)綠色時，谷類繼續(xù)消煮30分鐘，豆類繼續(xù)消煮60分鐘。
*應(yīng)加熱有硫酸部位的瓶底，不使瓶壁的溫度過高，以免銨鹽受熱分解造成氮的損失。
5.2.2 將試樣置于50毫升凱氏瓶中，加入0.5克加速劑和3毫升混液，在凱氏瓶上放一曲頸小漏斗、傾斜置于電爐上加熱，開始小火（用調(diào)壓器將電壓控制在175伏左右），保持凱氏瓶中液體呈微沸狀態(tài)。5分鐘后加大火力（將電壓控制在200伏左右），保持凱氏瓶中的液體連續(xù)沸騰。消煮總時間，水稻、高粱為30分鐘，其他均為45分鐘。
注：采用5.2.1或5.2.2消煮，其準(zhǔn)確度與精密度一致，可任取一種。
5.3 蒸餾、消煮液稍冷后加少量蒸餾水，輕振搖勻。移入半微量蒸餾裝置的反應(yīng)室中，用適量蒸餾水沖洗凱氏瓶4～5次。蒸餾時將冷凝管末端插到盛有10毫升硼酸－指示劑混合液的錐形瓶中，向反應(yīng)室中加入40％氫氧化鈉溶液15毫升**，然后通蒸氣蒸餾，當(dāng)餾出液體積約達(dá)50毫升時，降下錐形瓶，使冷凝管末端離開液面，繼續(xù)蒸餾1～2分鐘，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶中。
**采用消煮條件5.2.2時加10毫升即可。
5.4 滴定 谷類以0.02 N，豆類以0.05 N鹽酸或硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至錐形瓶內(nèi)的溶液由藍(lán)綠色變成灰紫色為終點。
5.5 空白 用0.1克蔗糖代替樣品作空白測定。消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積不得超過0.3毫升。
6 測定結(jié)果的計算
6.1 計算公式
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式中：V2── |
滴定試樣時消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（毫升）； |
| V1── | 滴定空白時消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（毫升）； |
| N── | 酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度，N； |
| K── | 氮換算成粗蛋白質(zhì)的系數(shù)； |
| W── | 試樣重量（克）； |
| X── | 試樣水分含量； |
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0.0140── |
每毫克當(dāng)量氮的克數(shù)。 |
6.2 平行測定的結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留小數(shù)后二位。
6.3 測定兩類作物種子粗蛋白質(zhì)的平行測定結(jié)果為15％以下時，其相對相差不得大于3％；15％～30％時為2％；30％以上時為1％。
6.4 結(jié)果報告中必須注明氮換算成粗蛋白質(zhì)的系數(shù)。換算系數(shù)見下表。
不同作物種子含氮量換算成粗蛋白質(zhì)之系數(shù)
| 種子 | 換算系數(shù) K |
| 麥類、豆類 水 稻 高 粱 大 豆 其他谷類 |
5.70 5.95 5.83 6.25 6.25 |
附 錄 A
參考資料
（參考件）
A.1 化學(xué)と生物，Vol 4，No2，1966年。
A.2 J.of AOAC，Vol 59，No 6，1976年。
A.3 International Assocition for Cereal Chemistry （ICC） Standard Nr.105。
A.4 International Standard ISO 1871。
A.5 AACC Method 46-10。
A.6 Fertilizer Abstracts，Vol 10，No 3，437，1977年。
附加說明：
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。
本標(biāo)準(zhǔn)由中國農(nóng)科院分析室起草。
